REscan 技术由 Giulia M.R. De Luca 等人在 2013 年首次提出,通过增加一套光学扫描单元,在保留共聚焦显微镜良好光切片能力的同时,突破传统共聚焦在分辨率和信噪比上的取舍限制。
传统共聚焦显微镜使用一个针孔(Pinhole)来阻挡焦平面以外的杂散光,以获得高分辨率和光学切片能力。但针孔越小,信号损失越严重,导致图像信噪比降低。REscan技术通过引入第二个扫描单元(即“重扫描器”,re-scanner)巧妙地解决了这个问题。其核心在于“解耦放大”:
1. 第一次扫描 (传统共聚焦部分):激光扫描样品,激发出的荧光信号经过共聚焦单元的针孔,这一步主要保证了轴向分辨率(即光学切片能力)。
2. 第二次扫描 (重扫描单元):通过针孔的光线进入重扫描器,被再次扫描并投射到一个高灵敏度的面阵相机(如sCMOS)上。
重扫描器以双倍的幅度进行扫描。这会产生两个效果:一是两个相邻的荧光分子在相机上的距离被拉大一倍;二是每个分子的发光点会被“拖曳”而略微变宽。最终的综合效果是,两个分子之间的距离增加得比光点变宽的程度更快,从而使得它们更容易被区分开,实现了分辨率的提升(横向分辨率可以提升约 1.4 倍)。

REscan 技术的主要优势为:
REscan 是一种“纯光学”的超分辨技术。这意味着图像在采集的同时就已经是超分辨的,无需额外的计算重构时间,因此成像速度更快,更适用于动态过程的观察。
由于 REscan 的分辨率提升不依赖于无限缩小针孔,因此可以使用更大的针孔,这使得更多的荧光信号被保留下来,同时配合高量子效率的相机,其信噪比可比传统共聚焦提升约一倍,这对于成像光毒性强的活细胞或表达量低的样本尤其重要。
Rescan 技术的横向分辨率比传统的共聚焦显微镜高出约1.4倍。例如,使用 488 nm 激发光时,分辨率可达 170 nm 左右,而传统共聚焦约为 240 nm。如果再结合解卷积算法,分辨率甚至可以达到 120 nm。

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